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北京六一電泳小知識-電泳

電泳
電泳是帶電顆粒在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。pH條件下,每一種分子都具有特定的電荷(種類和數(shù)量)、大小和形狀,它們在相同電場中泳動速度不同,各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動帶。這就是帶電粒子可以用電泳技術(shù)進行分離、分析和鑒定的基本原理。


 


影響泳動度的因素

1. 電場強度:

電場強度是指每厘米的電位降,也稱電位梯度(電勢梯度)。根據(jù)電場強度的不同,電泳可分為: 常壓電泳。分離時間較長,從數(shù)小時到數(shù)十小時 ,適合于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。如我廠生產(chǎn)的 6C、 8C等 高壓電泳。電泳時間很短,有時只需幾分鐘。多用于分離氨基酸、多肽、核苷酸、糖類等小分子物質(zhì)。
2 溶液的性質(zhì)

1)PH值

溶液的PH決定帶電顆粒的解離程度,也即決定其帶靜電荷的量。對蛋白質(zhì)而言,溶液pH值離等電點越遠,則顆粒所帶的凈電荷越多,泳動速度也越快;反之,則越慢。因此分離某種蛋白質(zhì)混合液時,應(yīng)選擇合適的pH,使欲分離的各種蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量有較大的差異

2)離子強度

溶液的離子強度,電泳較合適。若離子強度過高,則會降低顆粒泳動速度;若離子強度過低,則緩沖能力差,往往會因為溶液PH值的變化而影響泳動度的速率


3)溶液黏度

泳動度與溶液黏度是成反比關(guān)系

3 顆粒性質(zhì)

顆粒直徑、形狀以及所帶靜電荷量對泳動度有較大的影響。一般來說,顆粒的靜電荷量越大,或其直徑越小,或其形狀越接近球形,在電場中的泳動速度就越快。反之,則越慢

4 電滲

電泳緩沖液相對于固體支持物的移動稱電滲。常會因為支持物上存在的離子基團如羧基、羥基等吸附電極溶液中的正離子,使靠近支持物的溶液層相對帶電,向負極移動,反之,若支持物的離子基團吸附溶液中的負離子,則溶液層向正極移動。電滲作用會影響顆粒的泳動度,因此,在電泳時,電滲小些為好。


5 焦耳熱 電泳時會產(chǎn)生焦耳熱,使介質(zhì)粘度下降,分子運動加快,遷移率增加,同時溫度過高會使樣品中的生物大分子變性失活,因此電泳時,要控制電壓或電流,也可安裝冷卻散熱裝置。如我廠生產(chǎn)的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷卻循環(huán)裝置,可與WD-9412A型恒溫循環(huán)器配套使用

Q=I2Rt

Q-釋放出的熱量,I-電流強度,R-電阻,t-電泳時間

6.支持物

現(xiàn)代電泳多在固體支持物上進行,使樣品中的不同組分形成不同的區(qū)帶,稱區(qū)帶電泳。電泳結(jié)束后,支持物可以方便地進行染色等后續(xù)處理。 對支持物的一般要求是均勻,吸附力和電滲小,機械性能好,便于染色或紫外光下檢測,透明,無紫外吸收。常用支持物有濾紙,醋酸纖維素薄膜,淀粉凝膠,瓊脂糖凝膠等 支持物性質(zhì)不同也會影響泳動速率,如瓊脂糖和都有大小不同的篩孔,在篩孔大的凝膠中溶質(zhì)顆粒的泳動速率快,反之則慢。
 

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